刍析盐酸头孢噻呋乳液制剂制备及抑菌试验
摘要：以吐温-80、斯盘-80为乳化剂，甲基纤维素为助悬剂，通过表面活性剂复配方法制备了盐酸头孢噻呋乳液制剂，并对制剂稳定性、粒径进行了表征。结果表明，制备的盐酸头孢噻呋乳液制剂分散均匀，平均粒径0.137μm，粒径分布在0.065～0.188μm，加速试验盐酸头孢噻呋含量97.15%、长期稳定性试验盐酸头孢噻呋含量96.47%，均达到注射液制剂标准。将自制的盐酸头孢噻呋乳液制剂与市售的盐酸头孢噻呋混悬液以及头孢噻呋钠冻干粉通过琼脂扩散法对大肠杆菌菌株（E.coli）、金葡萄球菌菌株（Goldaureus）进行体外抗菌活性试验比较，具有较好的抑菌效果。 关键词：盐酸头孢噻呋；乳剂；抑茵试验 头孢噻呋（ceftiofur）又名赛得福，是美国法玛西亚普强公司创制的第一个畜禽专用的头孢菌素类抗生素，具广谱杀菌作用。该药1988年在美国首次上市，由于其优良的抗苗活性和药动学特点，于2012年在我国首次批准上市。头孢噻呋为类白色至淡黄色粉末，其分子式为C19H17N507S3，在水中不溶，在丙酮中微溶，在乙醇中几乎不溶，被制成头孢噻呋钠冻干粉以及盐酸头孢噻呋混悬液经皮下、乳房灌注或肌肉注射注射使用。但是，由于头孢噻呋钠冻干粉制剂在动物体内达峰时间短，半衰期短，抑菌时间不长；而盐酸头孢噻呋混悬液颗粒大，肌肉注射刺激性大，动物耐受性不强，因此头孢噻呋注射液剂型问题在国内一直未得到完全解决。 表面活性剂在制剂中广泛用作增溶剂、乳化剂、助悬剂、分散剂、稳定剂、吸收促进剂及改善药物的制备工艺等。难溶性药物通过乳化作用制成的乳状液型注射液，不仅能延长药物在体内的有效作用时间，减少用药次数，而且在提高药物的组织选择性方面显现较好的效果。 本文结合不同表面活性剂复配方法，制备出具有粒径小、半衰期长，肌肉注射刺激性小、动物注射耐受性好的盐酸头孢噻呋乳液制剂；对制剂稳定性、粒径进行了表征。通过琼脂扩散法对大肠杆菌菌株（E.coli）、金葡萄球菌菌株（Gold aureus）进行体外抗菌活性试验比较，并检测出抑菌圈大小，以期为拓展其它难溶性药物向乳液制剂发展提供基础和理论依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 HPIIOO型高效液相色谱仪，美国Agilent公司；Winner2308C激光粒度仪，济南微颗粒仪器股份有限公司；JJ-CJ-2FD双人单面垂直洁净工作台，成都市生科仪器有限公司。 大肠杆菌、金葡萄球菌，由重庆畜牧科学研究院提供；营养琼脂培养基和营养肉汤培养基，上海恒远生物科技有限公司；盐酸头孢噻呋、盐酸头孢噻呋混悬液、头孢噻呋钠冻干粉，西安康诺化工有限公司，其他试剂均为分析纯。 1.2 盐酸头孢噻呋乳液制备 称取盐酸头孢噻呋5.00g，吐温-804.50g，甲基纤维素1.0g于烧杯中，然后加入60℃的注射用水定容至70mL，搅拌均匀，加入含有2.60g、斯盘-80，60℃、30mL的大豆油，通过乳化机高速剪切乳化5 min，最后经3KGY的60Co-Y射线辐照灭菌，制成乳液型盐酸头孢噻呋注射剂。 1.3 盐酸头孢噻呋注射液稳定性试验研究 1.3.1 影响因素试验影响因素试验是在剧烈条件下进行的，目的是了解影响稳定性的因素及可能的降解途径和降解产物，为制剂工艺筛选、包装材料和容器的选择、贮存条件的确定等提供依据。将复配制成的盐酸头孢噻呋注射剂分别置于40℃、日照条件下10d，对样品的性状、有关物质、含量进行检测，研究硫酸头孢喹肟注射液稳定性。含量测定方法参照2010版兽药典盐酸头孢噻呋注射液质量标准进行。 1.3.2 加速试验加速试验是在超常条件下进行的，目的是通过加快市售包装中药品的化学或物理变化速度来考察药品稳定性，对药品在运输、保存过程中可能会遇到的短暂的超常条件下的稳定性进行模拟考察，并初步预测样品在规定的贮存条件下的长期稳定性。将复配制成的盐酸头孢噻呋注射剂放置在30℃±2℃条件下进行6个月试验。在试验期间第1、3、6个月末取样检测考察指标。 1.3.3 长期稳定性试验长期试验是在上市药品规定的贮存条件下进行，目的是考察药品在运输、保存、使用过程中的稳定性，能直接地反映药品稳定性特征，是确定有效期和贮存条件的最终依据。将复配制成的盐酸头孢噻呋注射剂在25℃±2℃条件进行试验，取样时间点在第一年一般为每3个月末一次，第二年每6个月末一次。 1.4 性能测试 乳液粒径：采用Winner2308C激光粒度仪测试盐酸头孢噻呋乳液粒径。 1.5 体外抗菌活性试验 琼脂扩散法是通过将抗生素在预先培养特定实验菌的琼脂培养基上产生浓度梯度，实验菌的繁殖被阻止于有效浓度范围之内而形成圆形的透明带即抑菌圈。根据抗生素浓度与抑菌圈直径呈一定线性关系，比较供试药物的抑菌活性。 1.5.1 菌悬液的制备在无菌条件下剪断菌种保藏管，加入灭菌肉汤约1mL使菌粉溶解；取另一支灭菌试管将菌液吸入其中，然后倒入灭菌肉汤至10mL，37℃在生化培养箱中培养24h。 1.5.2 培养基的制备称取33g琼脂培养基加入蒸馏水1L溶解，在立式高压灭菌锅内0.11MPa灭菌20min。
1.5.3 供试药品溶液制备盐酸头孢噻呋乳液、盐酸头孢噻呋混悬液、头孢噻呋钠冻干粉用50mL容量瓶配置成25mg/L的溶液。 1.5.4 检测平板的制备在烧杯内将营养琼脂培养基加热使其完全溶解，完成后放入高压灭菌锅中，在0.11MPa下灭菌20min，然后冷至60℃左右，再用灭菌好的吸管吸取20mL培养基加入水平放置的各个培养皿内，待培养基凝固并干燥完全。为免其他细菌污染，此时的平板应立即用于抑菌活性的试验。 1.5.5 指示菌茵悬液的涂布吸取菌悬液0.1mL滴在琼脂培养基平板上，轻轻用灭菌后的玻棒将菌悬液涂布均匀。 1.5.6 加入供试液将平板水平放置，用镊子将3只灭菌的牛津杯均匀地放入平板中，轻轻加压至无空隙。在牛津杯中滴入各浓度的供试液200μL，注意不要溢出。 1.5.7 指示菌的培养将加好供试液的平板放入培养箱中，37℃恒温培养36h。 1.5.8 抑菌圈直径测量在平板上菌体生长过程中，供试液在琼脂平板内梯度扩散阻止周围菌体的繁殖，从而形成圆形的不长菌的透明带即抑菌圈，用直尺测量抑菌圈直径。 2 结果与讨论 2.1 盐酸头孢噻呋注射液稳定性试验研究 将复配制成的盐酸头孢噻呋乳液进行影响因素试验、加速试验、长期稳定性试验，研究盐酸头孢噻呋乳液稳定性。结果（见表1、2、3）。通过影响因素试验、加速试验、长期稳定性试验可以看出，盐酸头孢噻呋乳液具有良好的稳定性，其药物含量受温度的影响较大；随着时间的增长，乳液外观色泽稍加深，有关物质逐渐增加，但仍未超过标准规定的限度，加速试验盐酸头孢噻呋含量97.15%、长期稳定性试验盐酸头孢噻呋含量96.47%，符合注射液要求。 2.2 性能测试 2.2.1 粒径分析通过Winner2308C激光粒度仪对盐酸头孢噻呋乳液进行粒径测试，其结果（如图1）。由图1可知，盐酸头孢噻呋乳液分散均匀，平均粒径0.137μm，粒径分布在0.065～0.188μm，远低于2010兽药典注射液要求的15μm粒径标准，具有较小的肌肉注射刺激性以及更好的耐受性。 2.3 体外抑菌实验 在培养箱中37℃恒温培养36h后，盐酸头孢噻呋乳液制剂A、盐酸头孢噻呋混悬液B、头孢噻呋钠冻干粉C对大肠杆菌菌株（E.coli）、金葡萄球菌菌株体外抑菌实验，其结果（见表4、表5）。实验中排除溶剂对抑菌作用的影响，随着时间延长，细菌的不断生长及抗生素代谢，抑菌圈会逐渐减小，抑菌圈较小得越慢，说明药效持续的时间越长，在体外抗菌活性试验中头孢噻呋钠冻干粉在短时间内对大肠杆菌体、金葡萄球菌具有较好的抑菌效果，而盐酸头孢噻呋乳液凭借粒径小、半衰期长等优点抑菌能力较强，并且药效持续时间明显优于其他制剂，具有较好的效果。 3 总结 本文制备出具有粒径小、半衰期长，肌肉注射刺激性小、动物注射耐受性好的盐酸头孢噻呋乳液，并通过琼脂扩散法将盐酸头孢噻呋及其不同制剂进行体外抗菌活性试验。结果表明盐酸头孢噻呋乳液制备方法简单，不仅抗菌活性好而且药效时间长，具有良好的发展前景。作者下一步将对盐酸头孢噻呋乳液在动物体内药代动力学及生物利用度方面进行深入研究，以求达到最佳的治疗效果。
